Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:02 мин. • July 8th, 2025
Возьмите аналитическую пластину, содержащую макрофаги, заквашенные липополисахаридом.
Прайминг увеличивает экспрессию неактивных предшественников провоспалительных цитокинов и белков NLRP3.
Добавьте нигерицин, ионофор калия, способствующий оттоку ионов. Это нарушает внутриклеточный уровень калия, запуская белки NLRP3 с образованием большого комплекса.
Олигомеризованный NLRP3 рекрутирует адапторные белки, ASC, вызывая их полимеризацию. Филаменты ASC рекрутируют про-каспазу-1, образуя NLRP3-инфламмасому, мультибелковый комплекс.
Про-каспаза-1 подвергается автоактивации, вызванной близостью, генерируя каспазу-1. Каспазы-1 расщепляют провоспалительный цитокин и белок гасдермин-D, создавая поры плазматической мембраны.
Это приводит к секреции цитокинов и воспалительной запрограммированной гибели клеток, пироптозу, высвобождению внутриклеточного содержимого, включая лактатдегидрогеназу, или ЛДГ. Соберите ЛДГ-содержащую надосадочную жидкость.
Добавьте смесь субстрата — лактат, йодонитретразолий фиолетовый или краситель INT, НАД+ и диафоразу. ЛДГ окисляет лактат до пирувата при одновременном снижении НАД+. Диафораза катализирует восстановление INT, образуя формазан красного цвета.
Интенсив
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео