Индукция и визуализация внеклеточных ловушек нейтрофилов в предварительно меченых нейтрофилах

0 просмотров4:32 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Начните с многолуночного планшета, содержащего флуоресцентно меченые нейтрофилы, и обработайте их сывороткой пациента, содержащей антинейтрофильные цитоплазматические антитела.

Эти антитела взаимодействуют с Fc-рецепторами нейтрофилов, активируя сигнальный путь, продуцируя активные формы кислорода или АФК и активируя пептидиларгининдеиминазу.

АФК вызывает дегрануляцию нейтрофилов, высвобождая в цитоплазму ферменты — эластазу и миелопероксидазу. Эти ферменты и активированные пептидиларгининдеиминазы транслоцируются в ядро.

Эластаза расщепляет гистон-H1, а миелопероксидаза модифицирует гистоны, инициируя деконденсацию хроматина. Активированная пептидиларгининдейминаза индуцирует цитруллинирование гистонов, превращая остатки аргинина в цитруллин и способствуя дальнейшей деконденсации.

Деконденсированный хроматин смешивается с внутриклеточными белками, включая антимикробные и цитоплазматические белки. Позже мембрана нейтрофила распадается, высвобождая деконденсированный хроматин, смешанный с цитоплазматическими белками, во внеклеточное пространство, образуя внеклеточную ловушку нейтрофилов (NET).

Добавьте непроницаемый для клеток краситель ДНК, связывающийся исключительно с внеклеточной ДНК в НВЛ. Под флуоресцентным микроскопом нейтрофилы выглядят красными с зелеными внеклеточными паутинчатыми структурами, подтверждающими образование НВЛ.

Изготовьте клеточную суспензию с плотностью 420 000 клеток на миллилитр в фенольной среде без красных РПМИ-1640, содержащей 2% FCS. Добавьте 37 500 нейтрофилов в 90 микролитрах в каждую лунку черного 96-луночного планшета с плоским дном.

Далее добавьте по 10 микролитров выбранного стимула, в трех экземплярах, чтобы достичь концентрации 10% в каждую лунку. Всегда включайте отрицательный контроль в трех экземплярах. Инкубируйте в темноте при температуре 37 градусов Цельсия в течение желаемого времени, от 30 минут до 2, 4 или 6 часов. Затем приготовьте объем непроницаемого красителя ДНК, необходимый для добавления 25 микролитров 5-микромолярного непроницаемого красителя ДНК, чтобы достичь конечной концентрации 1 микромоль в каждой лунке.

За 15 минут до окончания времени инкубации добавьте в каждую лунку по 25 микролитров 5-микромолярного непроницаемого красителя ДНК. Продолжайте инкубацию в течение последних 15 минут при температуре 37 градусов Цельсия в темноте. После этого очень осторожно извлеките надосадочную жидкость и при необходимости уберите в хранение. Добавьте 100 микролитров 4% параформальдегида. Держите тарелку в темноте, и сразу приступайте к следующему разделу.

После настройки параметров выберите Z Series. Выберите 10 в качестве количества шагов. Выберите 3 микрометра в качестве размера шага. Загрузите планшет в иммунофлуоресцентный конфокальный микроскоп.

Перейдите на вкладку «Запустить». Заполните название и описание тарелки и выберите место хранения. Выберите скважины, которые необходимо приобрести. Выберите время экспозиции для Texas Red и FitC, затем нажмите «Получить пластину» и начните сбор, который займет примерно 1 час на каждую пластину.

После этого выберите Макрос анализа. Затем выберите W1 и выберите пороговое значение. Затем выберите желаемое значение в пикселях, и, наконец, во втором окне ImageJ выберите W2 и выберите пороговое значение с желаемым значением в пикселях. Выберите место назначения файла электронной таблицы. Запустите анализ и сохраните файл журнала.

09:43

Упрощенный нейтрофилов человека Внеклеточные Ловушки (НРТ) Изоляция и регулировать

Похожие видео

0 Просмотры

10:58

Методы для изучения липидных изменений в нейтрофилах и последующее образование нейтрофильных внеклеточных ловушек

Похожие видео

0 Просмотры

07:33

Автоматизированная количественная оценка нейтрофилов с использованием NET-UANT

Похожие видео

0 Просмотры

14:17

Нейтрофилов внеклеточной Ловушки: Как создать и визуализировать их

Похожие видео

0 Просмотры

03:15

Флуоресцентная микроскопия внеклеточных ловушек нейтрофилов или НВЛ: метод наблюдения адгезивного взаимодействия между раковыми клетками и НВЛ

Похожие видео

0 Просмотры

06:45

Простой флуоресценция Анализ на Количественное Собачий Нейтрофильная внеклеточной Trap Release

Похожие видео

0 Просмотры

09:14

Визуализация внеклеточного ловушки макрофагов с помощью конфокальной микроскопии

Похожие видео

0 Просмотры

09:45

В пробирке Формирование собак нейтрофилов внеклеточного ловушка: Динамические и количественный анализ по микроскопии флуоресцирования

Похожие видео

0 Просмотры

09:59

Высок объём Assay оценить и количественно нейтрофилов внеклеточного ловушку формирования

Похожие видео

0 Просмотры

07:17

Иммунофлуоресценция Маркировка человека и Минин Нейтрофил Внеклеточные ловушки в парафин-встроенные ткани

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026