Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:57 мин. • July 8th, 2025
Возьмите стеклянную пробирку, содержащую гомогенат нейтрофилов с высвобожденными внутриклеточными компонентами.
Добавьте метанол, полярный растворитель, который нарушает липид-липидные и липид-белковые взаимодействия. Присущая метанолу полярность равномерно распределяет полярные липиды, солюбилизируя их. Затем добавьте хлороформ, неполярный органический растворитель, который взаимодействует с неполярными липидами, заставляя их диспергироваться и растворяться.
Центрифуга для отделения белоксодержащей гранулы от надосадочной жидкости, содержащей липиды, полисахариды и клеточный мусор. Переложите надосадочную жидкость в свежую стеклянную пробирку. Добавьте хлороформ и дистиллированную воду. Центрифугируйте образец.
Добавление воды спонтанно образует двухфазную систему, разделяющую биомолекулы в нижнем слоях хлороформа и верхних слоях водно-метанола.
Слой хлороформа содержит растворенные неполярные липиды, в то время как верхний слой содержит нелипидные загрязнители и большее количество полярных липидов. Удалите верхний водно-метанольный слой, не нарушая липидсодержащий слой.
Используйте вакуумный концентратор для удаления растворителя из липидов. Хранить при более низких температурах
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео