Методика оценки иммунного ответа на антиген путем индуцирования воспаления кожи

Возьмите мышь под наркозом и депилированными ушами и нанесите тестовый антиген — гаптен, смешанный с подходящим раствором транспортного средства — на открытые участки кожи. Транспортное решение способствует проникновению гаптена через самый внешний слой эпидермиса к нижележащей дерме.

Гаптен связывается с белками кожи, образуя иммуноген, распознаваемый антигенпрезентирующими клетками или АПК. После поглощения АПК обрабатывают и отображают иммуноген на своей поверхности.

АПК мигрируют в лимфатические узлы, представляя иммуноген наивным Т-клеткам и активируя их. Активированные клетки дифференцируются в праймированные Т-клетки памяти, подмножество которых мигрирует в кожу.

При повторном воздействии гаптена АПК представляют иммуноген праймированным Т-клеткам, индуцируя высвобождение провоспалительных цитокинов.

Цитокины заставляют кератиноциты и тучные клетки высвобождать хемокины, которые связываются с циркулирующими нейтрофилами, способствуя их экстравазации. Экстравазированные нейтрофилы достигают места воспаления.

Цитокины активируют нейтрофилы для производства протеолитических ферментов и активных форм кислорода, вызывая повреждение тканей и усиливая воспаление.

Для начала обезболите мышь с помощью внутрибрюшинной инъекции обезболивающего коктейля и подтвердите адекватную седацию с помощью теста на щипки пальцев ног. Далее нанесите крем для эпиляции на тыльную поверхность обоих ушей. Сотрите его в течение минуты и промойте кожу водой.

Измерьте толщину уха, в котором были сделаны аппликации, с помощью микрометра. Позже верните мышь в отдельную клетку после того, как она оправится от анестезии, и дайте мышке отдохнуть не менее трех дней перед дальнейшим тестированием.

Через три дня повторно обезболите мышь и снова измерьте толщину уха, чтобы убедиться, что она не раздражена. Затем нанесите 12,5 микролитров 1,25% оксазолона на каждую сторону правого уха и нанесите по 12,5 микролитров раствора ацетон-оливкового масла на каждую сторону левого уха.

Как всегда, наблюдайте, как мышь восстанавливается после анестезии. Через 24 часа снова измерьте толщину уха под анестезией, чтобы убедиться, что произошло воспаление кожи, вызванное оксазолонами.