Обнаружение прилипания бактерий к клеткам-хозяевам с помощью флуоресцентной визуализации

Возьмите многолуночный планшет, содержащий адгезивный монослой эпителиальных клеток, чувствительный к бактериальной адгезии.

Добавьте различное количество меченных флуоресцентными белками Pseudomonas aeruginosa, патогенной бактерии, чтобы достичь желаемого соотношения бактерий и эпителиальных клеток.

Центрифуга приблизит бактерии к эпителиальным клеткам, способствуя взаимодействию.

Пили IV типа, белковые волокна бактерий, играют ключевую роль, связываясь со специфическими гликолипидами на эпителиальных клетках, опосредуя прилипание бактерий к клеткам-хозяевам.

После инкубации промойте буфером для удаления неприлипших бактерий. Зафиксируйте клетки, чтобы сохранить клеточную структуру.

Добавьте DAPI, флуоресцентный краситель, который прочно связывается с A-T-богатыми участками ДНК, окрашивая ядро. Накройте ячейки буфером, чтобы предотвратить высыхание клеток.

Получение изображений меченых GFP бактерий, прикрепленных к эпителиальным клеткам с ядром, окрашенным DAPI. Перечислите прилипшие бактерии на одной эпителиальной клетке.

Увеличение количества адгезивных бактерий на клетку-хозяина дозозависимым образом позволяет количественно оценить взаимодействие хозяина и патогена.

Для анализа