Анализ иммунных синапсов между Т-клетками человека и SEB-загруженными клетками Раджи с помощью проточной цитометрии с помощью визуализационной проточной цитометрии

Возьмем, к примеру, проточные цитометрические пробирки, содержащие незагруженные клетки Raji и энтеротоксин В золотистого стафилококка или SEB-заряженные клетки Raji.

Эти загруженные SEB клетки Raji функционируют как суррогатные антигенпрезентирующие В-клетки, содержащие суперантиген SEB, интегрированный с молекулами MHC класса II.

Инкубировать с пан-лейкоцитами.

Т-клеточные рецепторы, TCR на Т-клетках, связываются с SEB на клетках Raji, которые, наряду с костимулирующими сигналами, устанавливают стабильное межклеточное соединение, иммунный синапс, что приводит к активации Т-клеток.

Это запускает внутриклеточные сигнальные пути, вызывая перестройку актинового цитоскелета с кластеризацией сигнальных молекул и поверхностных рецепторов в синапсе.

После инкубации закрепите клетки, чтобы сохранить их клеточную структуру. Проникайте в клетки для доступа к внутриклеточным мишеням.

Добавьте меченые флуорофорами анти-CD3 антитела, фаллоидин и DAPI, которые связываются с CD3 в комплексе TCR, актиновых филаментах и ДНК соответственно.

С помощью проточного цитометра визуализируйте флуоресцентные сигналы от CD3 и актина, чтобы определить их обогащение в синапсе в присутствии SEB.

Начните с смеш