Кальцеиновое ацетоксиметиловое окрашивание для оценки цитотоксичности, опосредованной естественными клетками-киллерами по отношению к раковым клеткам

Для начала возьмите пробирку, содержащую раковые клетки в бессывороточной среде, чтобы свести к минимуму интерференцию сывороточной эстеразы во время анализа. Инкубировать с нефлуоресцентным кальцеиновым красителем AM.

Активные внутриклеточные эстеразы гидролизуют кальцеин AM в мембранонепроницаемый флуоресцентный кальцеиновый краситель, остающийся в цитоплазме.

Пластинчатые окрашенные кальцеином раковые клетки и эффекторные NK-клетки в тестовых лунках, в то время как контрольные лунки содержат только окрашенные кальцеином раковые клетки без NK-клеток.

Активирующие рецепторы клеточной поверхности NK-клеток связываются с активирующими лигандами на раковых клетках, образуя иммунный синапс. Это связывание активирует передачу сигналов NK-клеток, поляризуя цитотоксические гранулы, содержащие перфорины и гранзимы, в сторону синапса для высвобождения.

Перфорины образуют поры мембраны раковых клеток, способствуя клеточному проникновению гранзимов и инициируя апоптоз. Нарушенная целостность мембраны вызывает утечку флуоресцентного кальцеина, снижая флуоресценцию раковых клеток.

Получение флуоресцентных изображений скважин.

Меньшее количество флуоресцентных живых раковых клеток в лунках, сод