Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:29 мин. • July 8th, 2025
Начните с добавления хемоаттрактантов, таких как хемокин, в многолуночный планшет.
Поместите в лунку трансвеллерную проницаемую камеру с соответствующим размером пор. Добавьте в верхнюю камеру суспензию естественных киллеров, или NK-клеток, и инкубируйте.
Несколько молекул хемокинов диффундируют через мембрану и связываются с рецепторами NK-клеток. Это запускает сигнальные пути, которые способствуют изменениям в цитоскелете, что приводит к направленному движению клеток к более высокой концентрации хемоаттрактанта в нижней камере.
После инкубации перенесите фиксированный объем мигрировавших клеток из нижней камеры в сортировку клеток, активируемых флуоресценцией, или пробирку FACS. Добавьте заданное количество флуоресцентных счетных шариков и выполните подсчет клеток на основе FACS.
Используя следующую формулу, определите абсолютное количество мигрировавших NK-клеток в образце.
Точечная диаграмма показывает количество счетных бусин и ячеек, разделенных в виде отдельных областей, на основе их флуоресценции и рассеивающих свойств.
Чтобы измерить миграцию NK-клеток в ответ на хемотаксические стимулы, соберите NK-клетки человека из 70-80% конфлюентной культуры и ресуспендируйте клетки в
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео