Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 5:36 мин. • July 8th, 2025
Эффероцитоз – это процесс, при котором фагоцитарные клетки выводят апоптотические клетки.
Для анализа эффероцитоза получают чувствительные к апоптозу тимоциты мышей. Инкубировать с проникающим в клетки красителем CFSE.
Внутриклеточные эстеразы расщепляют CFSE до непроницаемого для клеток флуоресцентного красителя, окрашивая тимоциты. Добавьте термоинактивированную сыворотку, чтобы предотвратить чрезмерное окрашивание.
Поместите окрашенные тимоциты на планшет для культивирования. Добавьте ставроспорин, ингибитор протеинкиназы, который нарушает критический клеточный сигнальный каскад, индуцируя апоптоз. Кроме того, остатки фосфатидилсерина перемещаются к внешнему листку клеточной мембраны, функционируя как «сигналы к поеданию».
Добавляйте увеличивающие концентрации апоптотических тимоцитов в лунки с несколькими лунками, содержащими активированные перитонеальные макрофаги мыши, которые экспрессируют специфические рецепторные тирозинкиназы.
Эти киназы связываются с экспонированным фосфатидилсерином на апоптотических тимоцитах, облегчая их интернализацию макрофагами.
После инкубации удалите свободно плавающие апоптотические тимоциты. Добавьте меченые флуорофорами антитела к CD11b, котор
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео