Анализ бактериальной инфекции для изучения анаэробных взаимодействий бактерий и клеток-хозяев

Начните с культивирования эндотелиальных клеток.

Замените среду на анаэробную. Инкубировать в анаэробной камере для температурного равновесия.

Добавьте Porphyromonas gingivalis, патогенную анаэробную бактерию, и коротко инкубируйте.

Бактерии обладают белковыми выступами, известными как фимбрии, которые связываются со специфическими молекулами адгезии на эндотелиальных клетках, способствуя адгезии бактерий.

Это связывание запускает внутриклеточные сигнальные каскады, что приводит к перестройке цитоскелета актина и интернализации бактерий в фагосомы.

После инкубации удалите среду. Промойте с анаэробным буфером для удаления неадгезивших внеклеточных бактерий.

Добавьте мягкое моющее средство, чтобы проникнуть в мембраны клеток хозяина и вызвать лизис клеток, высвобождая внутренние и прикрепленные к поверхности бактерии, не вызывая повреждений.

Разбавляют лизатсодержащие бактерии средами и готовят серийные разведения.

Нанесите эти разведения на кровяные агаровые пластины. Инкубируйте в анаэробных условиях, чтобы позволить Porphyromonas gingivalis размножаться и образовывать колонии.

После инкубации подсчитайте колониеобразующие единицы (КОЕ) на каждой пластине, чтобы количественно опред