Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:19 мин. • July 8th, 2025
Начните с суспензии активно растущих Porphyromonas gingivalis, анаэробных патогенных бактерий.
Добавьте BCECF-AM, нефлуоресцентный, проникающий в клетки краситель.
Активные цитоплазматические эстеразы гидролизуют краситель во флуоресцентную, непроницаемую для клеток форму, окрашивая бактерии.
центрифуга. Ресуспендируйте бактерии в анаэробных средах.
Добавьте меченые бактерии в лунки с многолуночными планшетами, содержащие покровные стекла с прилипшими эндотелиальными клетками человека.
Инкубировать в анаэробной камере.
Бактериальные фимбрии связываются с рецепторами поверхности эндотелиальных клеток, инициируя внутриклеточные сигнальные каскады.
Это приводит к перестройке актина и интернализации бактерий в фагосомах.
После инкубации промойте покровные стекла с буфером для удаления невнутренних бактерий.
Закрепите клетки с помощью параформальдегида, чтобы сохранить клеточные структуры. Проникните в клетки неионогенным детергентом для доступа к внутриклеточным мишеням.
Добавьте флуоресцентно меченный фаллоидин, который связывается с актиновыми филаментами.
Поместите покровное стекло на монтажный материал, содержащий DAPI, который окрашивает ДНК.
Наблюдайте за флуоресцентными Porphyro
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео