Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:18 мин. • July 8th, 2025
Начнем с адгезивных субпопуляций макрофагов М1 и М2, отличающихся специфическими поверхностными маркерами. Эти клетки инфицированы мечеными флуоресцентными микобактериями туберкулеза.
Добавьте буфер FACS в лунки для культуры.
ЭДТА в буфере обеспечивает отделение клеток от культуральных лунок.
Перенесите клеточную суспензию в микроцентрифужные пробирки.
Центрифугируйте пробирки. Выбросьте надосадочную жидкость. Ресуспендируйте клетки в коктейле антимакрофагальных антител с флюорохромом и красителе для жизнеспособности Zombie-UV.
Флуоресцентный краситель Zombie-UV проникает в мертвые клетки через поврежденные мембраны и связывается с цитоплазматическими белками, обеспечивая четкую дифференцировку от жизнеспособных неокрашенных клеток.
Кроме того, флуоресцентно-конъюгированные антимакрофагальные антитела связываются с антигенами-мишенями на макрофагах, что позволяет дифференцировать субпопуляции.
Промойте клетки, чтобы удалить несвязанные антитела. Центрифуга. Удалите надосадочную жидкость.
Ресуспендируйте клетки в фиксирующем буфере для сшивания белков, сохраняя морфологию клеток и инактивируя микобактерии для безопасного использования во время анализа.
Наконец, центрифугируйте и обр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео