Окрашивание бактериальных клеток и подготовка к иммунологическим исследованиям

Начните с пробирки, содержащей бактериальную культуру в экспоненциальной фазе, обеспечивая однородность и активное выращивание бактерий для стабильных результатов.

Центрифуга для сбора клеток; аспирация содержащего мусор надосадочной жидкости и ресуспендирование клеток.

Введите проницаемый для клеток красный флуоресцентный краситель. Молекулы красителя проникают через клеточную мембрану бактерии и достигают нуклеоида, связываясь с ДНК и придавая бактериям красную флуоресценцию.

Центрифуга для гранулирования окрашенных бактерий и аспирации несвязанного надосадочного вещества, содержащего краситель.

Ресуспендируйте бактерии в питательную среду для поддержания жизнеспособности клеток.

С помощью фотометра измерьте абсорбцию разбавленной бактериальной суспензии на 600 нанометрах.

Сравните значение поглощения со стандартной кривой, чтобы определить концентрацию бактерий.

Перелейте нужный объем окрашенной бактериальной суспензии в свежую пробирку, содержащую питательную среду. Это необходимо для достижения желаемой бактериальной концентрации инфекции в клетке-хозяине, представляющей множественность инфекции, или MOI.

Окрашенные бактерии с нужным MOI готовы к иммунологическим исследованиям