Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:40 мин. • July 8th, 2025
Принимайте клетки лейкемии в питательных средах без стимулирующих факторов, таких как цитокины, и инкубируйте их.
Отсутствие стимулирующих факторов позволяет внутриклеточным фосфорилированным белкам подвергаться дефосфорилированию и возвращаться в исходные состояния.
Центрифугируйте и удалите среду. Ресуспензирует клетки в строме-надосадочную жидкость, содержащую цитокин, стромальный лимфопоэтин тимуса или TSLP.
TSLP связывается со своим рецептором на лейкозной клетке, запуская димеризацию рецептора.
Это сближает две янус-ассоциированные киназы, или JAK, способствуя взаимному трансфосфорилированию.
Активированные JAKs фосфорилируют цитоплазматические хвосты рецептора, создавая стыковочные сайты для преобразователя сигнала и активатора транскрипции, мономеров STAT.
После фосфорилирования STATs димеризуются и отделяются от рецептора, чтобы регулировать последующие клеточные процессы.
Фиксируют клетки для поддержания состояний фосфорилирования внутриклеточных белков.
Обработайте клетки раствором для пермеабилизации, чтобы увеличить проницаемость клеточной мембраны.
Добавьте флуоресцентно меченые антитела для мечения фосфорилированных белков.
Проточно-цитометрическое измерение сигнала
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео