Визуализация бактерий в срезах биопсии мочевого пузыря с помощью флуоресцентной гибридизации in situ
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 6:10 мин. • July 8th, 2025
Начните со предметного стекла с депарафинизированным и регидратированным инфицированным срезом ткани биопсии мочевого пузыря, содержащим уропатогенные бактерии.
Введение флуоресцентно меченных универсальных зондов — комплементарного одноцепочечного олигонуклеотида, специфичного для консервативной области бактериальной 16s рибосомальной РНК, или 16s-рРНК.
Инкубируйте предметное стекло в темноте при повышенной температуре для оптимальной гибридизации.
Во время инкубации зонды гибридизуются исключительно с консервативной областью на бактериальной 16s-рРНК, придавая бактериям зеленую флуоресценцию.
После гибридизации промойте предварительно подогретым буфером, чтобы удалить несвязанные зонды.
Окрашивайте участок ткани красителем Хёхста и маркерами клеточных белков, меченных флуорофорами.
Молекулы Хёхста связываются с ДНК, окрашивая ядра в синий цвет, в то время как меченые флуорофорами маркеры взаимодействуют со специфическими компонентами клетки, такими как муцин и актиновые филаменты, придавая красную флуоресценцию в биопсийном срезе.
Промойте предметное стекло и добавьте монтажный материал в секцию салфетки.
Под конфокальным микроскопом зеленая флуоресценция в красном флуоресцентном
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео