Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 5:37 мин. • July 8th, 2025
Возьмем, к примеру, цитометрические трубки, содержащие окрашивающую смесь, содержащую флуоресцентно меченые моноклональные антитела, суспендированные в стимулирующем буфере.
Добавьте уменьшающиеся концентрации исследуемого аллергена в несколько пробирок. Добавьте антитела против IgE в одну пробирку, чтобы они служили IgE-опосредованным положительным контролем, и добавьте буфер в другую пробирку для отрицательного контроля.
Пипеткой подайте человеческую периферическую кровь в пробирки. Инкубировать.
Если человек сенсибилизирован к испытуемому аллергену, это воздействие приводит к тому, что аллерген связывается с аллерген-специфическими антителами IgE, связанными с Fc-рецепторами на поверхности базофилов.
Аллергены сшивают IgE-связанные Fc-рецепторы, вызывая активацию базофилов.
Базофилы подвергаются дегрануляции, высвобождая внутриклеточные гранулы, содержащие медиаторы воспаления, с активацией молекул CD63 и CD203c.
Флуоресцентно меченные моноклональные антитела связываются с CD63, CD203c и CCR3 на базофилах соответственно.
Понизьте температуру, чтобы остановить дегрануляцию базофилов.
Добавьте буфер к лизиру эритроцитов и закрепите клетки.
С помощью проточного цитометра определить
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео