Анализ цитотоксичности, опосредованный клетками-киллерами, подготовка образцов для проточного цитометрического анализа

Начните с клеточной гранулы, содержащей естественные киллеры или NK-клетки, а также флуоресцентно окрашенные клетки-мишени.

Повторно суспендируйте гранулу в подходящей среде и инкубируйте.

NK-клетка взаимодействует через поверхностные белки адгезии, образуя иммунологический синапс с клеткой-мишенью.

Это инициирует передачу сигналов NK-клеток, высвобождая цитотоксические гранулы, содержащие перфорин и гранзимы, в синапс.

Перфорин, белок, образующий поры, создает каналы в мембране клетки-мишени, позволяя гранзимам проникать в цитоплазму.

Гранзим, сериновая протеаза, взаимодействует с внутриклеточными белками, активируя путь апоптоза в клетке-мишени.

Теперь добавьте флуоресцентный краситель йодида пропидия.

Краситель проникает в мертвые клетки через их поврежденные мембраны и связывается с ДНК, интеркалируя между парами оснований.

Следовательно, мертвые клетки экспрессируют двойной флуорохром, в то время как живые клетки экспрессируют одинарный флуорохром.

Образец готов к проточной цитометрии для оценки цитотоксичности, индуцированной NK-клетками, путем количественного определения количества мертвых и живых клеток-мишеней.

Чтобы получить образец для анализа цитотоксичности, сначала по