Оценка цитотоксичности и целостности мембраны в срезах легких с помощью анализа лактатдегидрогеназы

Начните с прецизионно вырезанных человеком ломтиков легких, PCLS, обработанных цитотоксическими агентами, такими как молекулы поверхностно-активных веществ, в многолуночном планшете.

Поверхностно-активное вещество встраивается в липидный бислой клетки, заставляя гидрофобные хвосты поверхностно-активного вещества взаимодействовать с гидрофобным ядром липидного бислоя.

В результате нарушается упорядоченное расположение молекул липидов, что приводит к образованию мицеллы.

Это нарушает целостность мембраны, вызывая утечку внутриклеточного содержимого, включая лактатдегидрогеназу или ЛДГ, распространенный показатель повреждения клеточной мембраны.

Соберите надосадочную жидкость, содержащую выделяющийся ЛДГ.

Добавьте коктейль из реакции анализа ЛДГ, содержащий субстрат лактата, НАД+, поторазу и соль тетразолия, и инкубируйте.

ЛДГ окисляет лактат до пирувата, с одновременным восстановлением кофермента НАД+ до НАДН.

Diaphoraze использует NADH для восстановления соли тетразолия до формазана — окрашенного продукта.

Цитотоксичность, вызванная сурфактантом, может быть измерена по активности ЛДГ, на которую указывает продукция формазана.

После инкубации PCLS с тестирующими агентами или без них