JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 2:40 мин • July 8th, 2025
Начните с добавления иммуномодулирующего фармакологического агента к незрелым дендритным клеткам, или ДК.
ДК экспрессируют основной комплекс гистосовместимости, или молекулу MHC класса II и костимулирующие молекулы, которые имеют решающее значение для стимулирования пролиферации Т-клеток во время иммунных реакций.
Иммуномодулирующий агент взаимодействует с ДК и запускает подавление экспрессии MHC класса-II и ко-стимулирующих молекул, тем самым превращая ДК в толерогенную дендритную клетку или TolDC.
Совместное культивирование TolDCs с наивными CD4+ Т-клетками.
Добавьте антигенный пептид к сокультуре.
TolDC интернализуют пептид, впоследствии обрабатывая и загружая полученный антиген в молекулу MHC.
Связанная с антигеном молекула MHC перемещается к клеточной мембране.
Наивные CD4+ Т-клетки напрямую взаимодействуют с комплексом антиген-MHC на TolDCs.
Взаимодействие с ко-стимулирующей молекулой на зрелом ДК обеспечивает полную активацию наивной Т-клетки.
Без костимуляции наивная CD4+ Т-клетка остается в спящем состоянии и не может инициировать иммунный ответ против представленного антигена.
Ресуспендируйте клетки в концентрации 2 x 105 дендритных клеток на миллилитр и обрабатывайте их соответствующей экспериментальной концентрацией представляющего интерес тритерпеноида в течение 1 часа при 37 градусах Цельсия.
В течение последней трети инкубации ресуспендируйте Т-клетки в концентрации 1 x 107 клеток на миллилитр и 1 микромолярный CFSE в течение 15 минут при 37 градусах Цельсия. Затем промойте клетки PBS и отрегулируйте объем до конечной концентрации 2 x 106 Т-клеток на миллилитр.
Совместно культивировали 100 микролитров обработанных дендритных клеток со 100 микролитрами меченых CFSE CD4 CD4-положительных Т-клеток в каждой лунке 96-луночного планшета и добавляли 100 нанограммов на миллилитр пептида OVA 322-329 к клеткам, измеряя интенсивность CFSE Т-клеток с помощью проточной цитометрии после 2-3 дней инкубации.