Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:54 мин. • July 8th, 2025
Принимайте спленоциты, истощенные эритроцитами, в буфере, содержащем кальций-чувствительный флуоресцентный краситель Indo-1 AM.
Внутриклеточные эстеразы расщепляют Indo-1 AM на непроницаемый для мембраны Indo-1, который связывается с ионами кальция, изменяя флуоресцентный сигнал Indo-1 с синего на фиолетовый.
Введение флуорофор-конъюгированных антиген-специфических антител, которые специфически связываются с соответствующими антигенами на клетках.
С помощью проточной цитометрии можно идентифицировать меченые флуорофорами В-клетки и измерить их отношение фиолетовой и синей флуоресценции Indo-1.
Теперь обработайте клетки антигенными липосомами, содержащими Fab-фрагменты IgM, конъюгированные с бислоями липосом.
Рецепторы В-клеток связываются с антигенами, связанными с липосомами, активируя связанные цитоплазматические тирозинкиназы и запуская активацию фосфолипазы-С гамма-2.
Активированная фосфолипаза-С расщепляет мембрану фосфолипид, фосфатидилинозитол 4,5-бисфосфат, образуя вторичные мессенджеры, в том числе инозитол 1,4,5-трисфосфат, или IP3.
IP3 связывается с IP3-зависимыми кальциевыми каналами на эндоплазматическом ретикулуме, высвобождая ионы кальция в цитоплазму.
Эти ионы кальц
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео