Оценка контролируемой активации Т-клеток с помощью фотоактивируемого пептида MHC

Начните с покрытия покровного стекла биотинилированным поли-L-лизином для создания поверхности, богатой биотином.

Далее вводят стрептавидин — белок, который связывается с биотином, образуя молекулярный мостик для последующих взаимодействий.

После этого добавьте биотинилированные пептиды в клетке, связанные с основными комплексами гистосовместимости — pMHC вместе с молекулами адгезии.

Биотинилированные лиганды pMHC и молекулы адгезии взаимодействуют с определенными областями стрептавидина, обеспечивая их иммобилизацию.

Затем несколько раз промойте покровное стекло буферным физиологическим раствором и введите Т-клетки.

Наличие фотоклетки, светочувствительной химической группы, привязанной к определенному остатку на пептиде, препятствует спонтанному связыванию рецептора Т-клеток с пептидом.

Для контролируемой активации Т-клеток подвергайте пептиды в фотоклетке воздействию ультрафиолетового света.

Ультрафиолетовое излучение разрывает химическую связь между фотоклеточным пептидным комплексом, обнажая нативную форму пептида.

Рецепторы Т-клеток идентифицируют и прикрепляются к экспонированным пептидам, в то время как интегрины связываются с молекулами адгезии, запуская активацию Т-клеток.