Оценка топологии иммунологических синапсов с помощью визуализации живых клеток

Возьмем чашку для микроскопа с буфером, содержащим трансфицированные, обработанные суперантигенами эндотелиальные клетки человека, причем суперантигены объединены с молекулами MHC класса II.

Эти искусственные антигенпрезентирующие клетки совместно экспрессируют различные флуоресцентные белки на своих мембранах и цитоплазме.

Затем вводят Т-лимфоциты, которые взаимодействуют с суперантигенами на эндотелиальных клетках через Т-клеточные рецепторы, образуя стабильное межклеточное соединение, иммунологический синапс.

Это вызывает перестройку цитоскелета Т-лимфоцитов, инициируя распространение клеток и удлинение актина, что приводит к образованию инвадосомоподобных выступов, или ILP, обогащенных актином, адгезией и сигнальными молекулами.

Молекулы адгезии связывают специфические рецепторы на эндотелиальных клетках, усиливая взаимодействие.

Образование синапсов активирует сигнальные пути Т-лимфоцитов, повышая внутриклеточный уровень кальция и стабилизируя ILP.

ILP индуцируют локализованный изгиб мембраны в эндотелиальных клетках, образуя переходные поверхностные кольца.

Под флуоресцентным микроскопом проанализировать топологию синапсов, включающую темные круглые зоны смещения флуоресцентн