Метод иммунофлуоресцентной локализации in vivo для изучения биораспределения антител

Возьмем мышиную модель рака молочной железы. Опухоли молочных желез включают раковые клетки, ассоциированные с раком фибробласты, адипоциты, иммунные клетки и опухолевую сосудистую сеть.

Внутривенно ввести флуорофор-конъюгированные опухолеспецифические антитела.

Достигая сосудистой сети опухоли, антитела связываются с опухолеспецифичными трансмембранными белками на эндотелии сосуда и близлежащих раковых клетках.

Хирургическим путем изолируйте молочную железу и погрузите ее в замораживающую среду.

Получить криорезы на предметном стекле и промыть с помощью буфера для удаления замораживающей среды.

Зафиксируйте срезы, чтобы сохранить архитектуру тканей. Нанесите моющее средство для усиления иммуноокрашивания и блокирующий раствор для предотвращения связывания неспецифических антител.

Введите первичное антитело, специфичное для молекул адгезии на эндотелии кровеносного сосуда, и вторичное антитело, конъюгированное с флуорофором, которое связывается с первичным антителом, мечая сосудистую сеть.

Добавьте монтажный материал на предметное стекло и установите покровное стекло.

Под конфокальным микроскопом оцените биораспределение опухолеспецифических антител внутри и вокруг флуоресцентно ме