JoVE Encyclopedia of Experiments
Иммунология
0 просмотров • 2:59 мин • July 8th, 2025
Возьмите Mycobacterium bovis BCG, ослабленную бактерию, вызывающую туберкулез, и введите ее мыши.
Воспалительная реакция против бактерий образует гранулему, состоящую из бактерий, эпителиоидных макрофагов, обычных макрофагов и лимфоцитов.
Проведите магнитно-резонансную томографию или МРТ. Магнитное поле выравнивает случайно ориентированные протоны в ткани в своем направлении.
Подайте радиочастотный импульс перпендикулярно магнитному полю. Протоны поглощают энергию импульса и отклоняются от поля.
Когда импульс останавливается, протоны излучают поглощенную энергию, называемую распадом свободной индукции или FID, и выравниваются с полем.
Измерьте сигнал FID для получения изображения. Продолжительность кариеса зависит от ткани, и участки с более длительным кариесом кажутся светлее.
Возьмите суперпарамагнитные нанозонды, конъюгированные с поликлональными антителами, специфичными для микобактерий, и введите их внутривенно.
Антитела связываются с несколькими эпитопами на бактериях, помечая гранулему.
Нанозонды укорачивают распад соседних протонов, чтобы гранулема казалась темнее, подтверждая микобактериальную инфекцию.
Чтобы инокулировать экспериментальных животных M. bovis BCG, сначала восстановите лиофилизированную вакцину или бактериальный запас в среде Sauton и разбавьте восстановленный исходный раствор физиологическим раствором. Затем загрузите 100 микролитров раствора в один 1-миллилитровый шприц на каждое животное и введите весь объем бактерий, внутрикожно, в левую или правую спинную кожу лопатки каждой мыши.
Для магнитно-резонансной томографии in vivo живых животных, которым вводили нанозонды, необходимо получить исходные Т2-взвешенные быстроспиновые эхо-изображения каждого подопытного животного, находящегося под наркозом, перед введением двух наномолярных зондов антител SPIO-Tb, взвешенных в 200 микролитрах физиологического раствора, в хвостовую вену каждой мыши. Затем снова визуализируйте животных, сразу после инъекции, и каждые пять минут в течение следующих 30 минут.
В конце сеанса визуализации проанализируйте магнитно-резонансные изображения, используя интенсивность сигнала для измерения определенных областей интереса в сопоставимых местах центра гранулемы M. tuberculosis, а также мышцы спины, прилегающей к гранулематозной области. Затем используйте формулу для расчета относительных усилений сигнала, используя измерение интенсивности сигнала до и, от нуля до трех часов, после введения контрастных веществ.