Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:59 мин. • July 8th, 2025
Начните с пробирок, содержащих цельную человеческую кровь, включая эритроциты, эритроциты и лейкоциты, такие как моноциты и гранулоциты, а также другие клетки крови.
Введите дигидроэтидий — индикатор супероксида и немеченые бактерии в одну пробирку. Обработайте другую пробирку зелеными бактериями, меченными флуорофорами.
Гранулоциты и моноциты взаимодействуют с патоген-ассоциированными молекулами бактерий, поглощая их в фагосомах.
Это активирует фермент фагосомальной мембраны NADPHОКСИДАЗУ, восстанавливая молекулярный кислород до супероксид-аниона.
Супероксид-анион также производит перекись водорода — активную форму кислорода, или АФК, что приводит к окислительному взрыву.
В фагосоме АФК окисляет дигидроэтидий с образованием 2-гидроксиэтидия, который окрашивает бактериальную ДНК, придавая ей красный флуоресцентный цвет.
Введите гаситель, чтобы погасить внеклеточную флуоресценцию.
Добавьте лизирующий раствор, устраняющий потенциальные помехи эритроцитов, и зафиксируйте лейкоциты.
При проточной цитометрии клетки с зеленой флуоресценцией подтверждают фагоцитарную активность гранулоцитов и моноцитов, в то время как клетки с красной флуоресценцией в другой пробирке указывают на активнос
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео