Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:59 мин. • July 8th, 2025
Возьмите микропланшет, содержащий нейтрофильные сериновые протеазы или NSP. Эти растворимые ферменты с протеолитической активностью, секретируемые нейтрофилами, участвуют в воспалительных реакциях.
Добавьте флуоресцентные репортерные зонды с мотивом распознавания, который действует как сайт расщепления для NSP. Зонды конъюгированы с донором и акцепторным флуорофором.
При возбуждении определенной длиной волны донорный флуорофор излучает энергию. Благодаря близости к донору, акцепторный флуорофор поглощает энергию и излучает флуоресценцию различной длины волны.
Обнаруживайте сигналы донора и акцептора по отдельности и вычисляйте соотношение доноров и акцепторов для оценки активности NSP. Низкое соотношение свидетельствует о гашении донорной флуоресценции при отсутствии расщепления зонда.
NSP распознают и расщепляют мотив распознавания на зондах, освобождая акцептор.
Расстояние от акцептора обеспечивает флуоресцентное излучение от донорского флуорофора, увеличивая соотношение доноров и акцепторов. Высокий коэффициент указывает на эффективное расщепление зонда NSP.
Разморозьте ферменты на льду и установите стандартную кривую ферментов, как описано в рукописи текста. Параллельно со стан
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео