Оценка активации множественных каспаз в макрофагах
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:01 мин. • July 8th, 2025
Начните с многолуночного планшета, содержащего слипшиеся макрофаги, полученные из костного мозга.
Ввести вирусы гриппа А, которые сливаются с макрофагами, высвобождая рибонуклеопротеины, содержащие вирусную РНК.
Z-ДНК-связывающий белок 1 макрофагов, или ZBP1, взаимодействует с вирусными рибонуклеопротеинами, вызывая олигомеризацию ZBP1, с киназами и каспазами 8.
Олигомеризованный ZBP1 далее рекрутирует инфламмасомные сенсорные белки, адапторные белки и прокаспазу-1, образуя мультимерный комплекс — PANoptosome.
В рамках PANoptosome инициирующая каспаза-8 активируется через близкое расщепление, далее активируя эффекторные каспазы, включая каспазы-3 и 7.
Кроме того, сенсорные белки инфламмасом в PANoptosome активируют сигнальный каскад, превращая про-каспазу-1 в ее активную форму, каспазу-1.
В то же время вирусная инфекция индуцирует высвобождение цитохрома-с из митохондрий, вызывая активацию апоптосомы и превращая про-каспазу-9 в ее активную форму.
Вирусная инфекция также запускает неканонический воспалительный путь, активируя каспазу-11.
Введите буфер для лизиса для лизиса макрофагов; соберите лизат и нагрейте его, чтобы инактивировать протеазы, предотвращая деградацию каспаз.
Центр
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео