Мультиплексный анализ на основе гранул для анализа цитокинов в образцах слезы человека

0 просмотров4:46 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Добавьте образцы слезы человека и коктейль из антител и бусин в промытую аналитическую пластину.

Антитела связываются с магнитными шариками с цветовой кодировкой, пропитанными различными пропорциями флуорофоров, соответствующих различным спектральным сигнатурам, что облегчает обнаружение множественных цитокинов.

Цитокины слезы связываются с соответствующими антителами захвата, связанными с бусинами.

С помощью магнитной промывки пластин установите комплексы антитела-шарики. С помощью буфера удалите несвязанные биомолекулы.

Добавьте биотинилированные антитела к детектированию, которые прикрепляются к связанным цитокинам.

Пипетка стрептавидин-фикоэритриновый конъюгат, который связывается с биотинилированными антителами.

С помощью шайбы для тарелок удалите несвязанное содержимое лунки. Ресуспендируйте связанные с цитокинами комплексы в жидкости оболочки

.

Во время анализа образца жидкостная система транспортирует шариковые комплексы к оптическому узлу.

Первый лазер активирует внутренние шарики красителей, в результате чего полученный сигнал идентифицирует конкретные цитокины.

Второй лазер активирует репортерную молекулу, связанную с комплексом шариков, интенсивность сигнала которого представляет собой концентрацию цитокинов, что позволяет одновременно количественно определять несколько цитокинов.

Чтобы провести мультиплексный анализ на основе шариков, доведите все реагенты до комнатной температуры и сделайте их вихревыми в течение 5-10 секунд. Если образцы слезы с элюированием хранились при температуре минус 80 градусов Цельсия до проведения анализа, разморозьте замороженные экстракты слезы на льду и центрифугируйте образцы при 1000 г в течение пяти минут. Подготовьте лист анализа в вертикальной конфигурации для рабочих стандартов цитокинов человека QC-1, QC-2 и образцов.

Добавьте 200 микролитров 1x промывочного буфера в каждую лунку пластины и запечатайте ее герметиком для пластин. Затем выдержите тарелку в шейкере при комнатной температуре в течение 10 минут. Затем сцедите буфер для стирки 1x, перевернув пластину, и несколько раз постучите им по впитывающим полотенцам, чтобы удалить остатки буфера для стирки в лунках.

Затем добавьте по 25 микролитров каждого рабочего стандартного цитокина человека QC-1, QC-2 и бланк только с буфером для анализа и образцами в соответствующие лунки. Добавьте в каждую лунку по 25 микролитров пробирного буфера. Затем в лунки добавьте 25 микролитров 1x раствора коктейля из бусин антител.

Поскольку раствор гранул антитела чувствителен к свету, закройте планшет и накройте его алюминиевой фольгой и крышкой для защиты от света во время анализа. Инкубируйте тарелку при температуре четыре градуса Цельсия в шейкере на ночь. На следующий день поместите пластину на решетку для тарелок автоматической магнитной мойки пластин и дайте ей постоять одну минуту, чтобы магнитные шарики осели на дне лунки.

Отсадите содержимое лунки и добавьте 200 микролитров промывочного буфера на лунку с помощью автоматической магнитной промывочной машины. Дайте тарелке постоять одну минуту, а затем втяните содержимое лунки, как и раньше, и повторите промывку еще раз. Добавьте в каждую лунку по 25 микролитров раствора антител для обнаружения. Закройте тарелку, накройте ее алюминиевой фольгой и крышкой тарелки и выдержите при комнатной температуре в шейкере в течение 60 минут. Затем добавьте в каждую лунку по 25 микролитров раствора стрептавидина-фикоэритрина, а после запечатывания и накрытия тарелки выдерживайте при комнатной температуре в шейкере в течение 30 минут.

После инкубации поместите пластину на магнитную шайбу для пластин и оставьте на одну минуту. Затем аспирируйте содержимое лунки и добавьте 200 микролитров промывочного буфера на лунку. Дайте ему постоять одну минуту, затем втяните содержимое лунки, прежде чем повторить промывку еще раз. Добавьте в каждую лунку по 150 микролитров жидкости оболочки. Затем поместите планшет на шейкер на пять минут при комнатной температуре, чтобы повторно суспендировать гранулы антител, прежде чем приступить к чтению планшета и анализу концентраций цитокинов.

11:00

Мультиплекс цитокина профилирование Splenocytes стимулировали мыши с использованием платформы на базе гранулярных шарик иммуноанализа

Похожие видео

0 Просмотры

06:29

Влияние искусственных слезных формулировок на метаболическую активность эпителиальных клеток роговицы человека после воздействия высыхания

Похожие видео

0 Просмотры

07:08

Экспресс-мультиплексный двойной репортер IgG и IgM SARS-CoV-2 нейтрализуя для мультиплексированной системы анализа потоков на основе шариков

Похожие видео

0 Просмотры

06:29

Точные и простые измерения провоспалительных цитокинов IL-1β использованием Всего Пробирная стимуляция крови

Похожие видео

0 Просмотры

04:45

Мультианалитный иммуногранулатический анализ: метод проточного иммуноанализа для одновременного обнаружения нескольких подтипов антител в образце сыворотки крови человека

Похожие видео

0 Просмотры

04:49

Мультиплексный иммуноферментный анализ на основе шариков для количественного определения нескольких цитокиновых мишеней

Похожие видео

0 Просмотры

09:22

Шарик на основе мультиплекс пробирного анализа слезоточивый цитокинового профиля

Похожие видео

0 Просмотры

06:37

Использование референтных реагентов для подтверждения надежности анализов высвобождения цитокинов для прогнозирования безопасности моноклональных антител

Похожие видео

0 Просмотры

09:43

Микрофлюидный подход к разрешению одномоментной и последовательной секреции цитокинов отдельных полифункциональных клеток

Похожие видео

0 Просмотры

09:04

Оптимизация сбора слезы у мышей для анализа мРНК и белка

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 15 августа 2026