Анализ для выявления продукции активных форм кислорода в тканях риса при иммунном выявлении

Возьмите микропланшет, содержащий однородные сегменты оболочки, вырезанные из проростков риса, и листовые диски, полученные из листьев растения риса.

Добавьте стерильную воду и инкубируйте в течение ночи, чтобы обеспечить восстановление после напряжения раны.

Добавьте иммуногенный пептид, полученный из бактериальных жгутиков, который действует как патоген-ассоциированный молекулярный паттерн или PAMP.

Растительные клетки на краях разреза связываются с PAMP через рецепторы распознавания образов.

Связывание запускает нисходящую передачу сигналов, активируя локализованный в плазматической мембране фермент, называемый гомологом респираторной оксидазы или RBOH.

Активированный RBOH производит активные формы кислорода или АФК в апопласте — межклеточном пространстве. Полученная АФК преобразуется в перекись водорода.

Добавьте фермент пероксидазу и хемилюминесцентный субстрат.

Пероксидаза использует перекись водорода для преобразования субстрата в промежуточный продукт в возбужденном состоянии, который высвобождает энергию в виде света и возвращается в основное состояние.

Измерьте люминесценцию в обоих типах тканей, чтобы обнаружить резкое увеличение сразу после лечения PAMP, указывающее на