Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:08 мин. • July 8th, 2025
Возьмем пробирки, содержащие репортерные макрофаги с геном секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы или фермента SEAP под индуцируемым промотором.
В одну пробирку вводят специфичное для макрофагов антитело Toll-подобный рецептор 2 или TLR2, нейтрализующее его активность.
В другом случае добавьте ингибитор для подавления передачи сигналов TLR4. Оставьте последнюю пробирку без обработки.
Возьмем камерное предметное стекло с адсорбированным слоем молекулярных паттернов, связанных с повреждением, или DAMP — белков, высвобождаемых во время некроза клеток.
Добавьте обработанные и необработанные макрофаги в отдельные лунки и инкубируйте.
TLR2 и TLR4 на необработанных макрофагах связываются с DAMP, активируя факторы транскрипции ядерного фактора каппа-B, или NF-κB, и белка-активатора-1, или AP-1.
Они транслоцируются в ядро и связываются с промотором SEAP, повышая выработку SEAP, который секретируется внеклеточно.
Перенесите содержащую SEAP надосадочную жидкость на микропланшет с хромогенной подложкой.
SEAP гидролизует субстрат, получая продукт фиолетово-синего цвета. Измерьте поглощение.
Нейтрализация TLR2 сильно снижает выработку SEAP, указывая на TLR2 в качестве основного медиатора
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео