Анализ цитолиза in vitro в режиме реального времени для оценки активности CAR-Т-клеток

Начнем с среды для культивирования клеток E-Plate — пластины с золотыми микроэлектродами на дне каждой лунки.

Засейте пластину раковыми клетками-мишенями, прилипшими к золотым микроэлектродам, образуя физический барьер между электродами.

Перенесите планшет в анализатор клеток и подайте электрический сигнал.

Прилипшие ячейки нарушают поток электронов между электродами, что приводит к затрудненному потоку электронов, измеряемому как импеданс.

По мере того, как эти элементы разрастаются и прилипают к электродам, электрическое сопротивление увеличивается пропорционально количеству адгезивных клеток, что позволяет проводить измерения в режиме реального времени.

Введение химерных антигенных рецепторов Т-клеток или CAR-Т-клеток, экспрессирующих химерные антигенные рецепторы. Эти рецепторы взаимодействуют с антигенами раковых клеток, активируя Т-клетки и формируя иммунологический синапс.

Активированные CAR-Т-клетки выделяют цитотоксические вещества, в том числе перфорины и гранзимы.

Перфорины образуют поры в мембране раковых клеток, способствуя проникновению гранзимов в клетки и индуцированию цитолиза.

Это способствует отслойке клеток, снижению электрического сопротивления, коррелируя с по