Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 5:14 мин. • July 8th, 2025
Возьмите многолуночный планшет, содержащий установленную модель инфекции Mycobacterium tuberculosis или Mtb.
Лунки содержат клеточные агрегаты, составляющие ядро плотно упакованных Mtb и инфицированных Mtb некротических макрофагов, окруженных неинфицированными макрофагами, имитирующими инфекцию in vivo.
Принимают серийное разведение антибиотиков рифампицина и моксифлоксацина.
Отбросьте среды с инфекционной пластины, перенесите разведения антибиотиков в лунки и инкубируйте.
Антибиотики диффундируют через клеточные агрегаты и проникают в бактериальные клетки.
Рифампицин связывается с бактериальной РНК-полимеразой, ингибируя синтез РНК и вызывая гибель бактерий.
Моксифлоксацин связывается с бактериальной ДНК-топоизомеразой, ингибируя репликацию и останавливая рост бактерий. Связывание также вызывает стрессовые реакции, в том числе накопление активных форм кислорода, убивая бактерии.
После инкубации добавьте резазурин — окислительно-восстановительный индикатор. Внутри живых и метаболически активных бактерий фермент оксидоредуктаза восстанавливает синий резазурин до розового флуоресцентного резоруфина.
Измерьте флуоресценцию для обнаружения жизнеспособных бактерий.
Выживаемость бактерий
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео