Анализ in vitro для изучения антителозависимого усиления вирусной инфекции

Возьмите микропланшет с серийными разведениями образца сыворотки, содержащего антитела против вируса Зика.

Добавьте частицы репортерного вируса Денге или RVP и инкубируйте.

Сконструированные RVP содержат оболочку со структурными белками и нуклеокапсид, содержащий геномную РНК, кодирующую флуоресцентный белок.

Структурная гомология оболочечных белков вирусов Денге и Зика приводит к тому, что антитела вступают в перекрестную реакцию с RVP, образуя комплекс.

Добавьте клетки лейкемии человека, недопустимые для инфицирования ПВП.

Клетки обладают Fc-рецепторами, которые распознают RVP-связанные антитела, облегчая проникновение RVP внутрь эндосом, что называется антителозависимым усилением или ADE.

Гранулируйте клетки и выбросьте надосадочную жидкость, содержащую неинтернализованные РВП. Добавьте питательную среду и инкубируйте.

pH-зависимое слияние RVP и эндосомальных мембран высвобождает нуклеокапсид, который распадается с выделением геномной РНК, обеспечивая экспрессию флуоресцентных белков.

Фиксируют клетки и анализируют их с помощью проточной цитометрии.

Более высокая флуоресценция при подходящей концентрации антител представляет собой повышенную интернализацию RVP, что указывает на