Анализ для скрининга биоактивных наночастиц на ингибирование передачи сигналов толл-подобных рецепторов

Возьмем многолуночный планшет с различными репортерными макрофагами, содержащими секретируемый эмбриональный ген щелочной фосфатазы, или ген SEAP, или секретируемый ген люциферазы под индуцируемыми промоторами.

Добавляйте в предназначенные лунки среды, содержащие различные пептидно-золотые наночастицы, смешанные с липополисахаридами или ЛПС.

ЛПС связывается с толл-подобными рецепторами макрофагов, или TLR, вызывая интернализацию в эндосоме.

Эндосомальный протонный насос транспортирует протоны внутрь. Подкисление запускает передачу сигналов TLR, активируя факторы транскрипции.

Эти факторы индуцируют экспрессию репортерных генов, продуцирующих SEAP или люциферазу.

С другой стороны, интернализация ЛПС вместе с гибридами приводит к тому, что отрицательно заряженные пептидные группы секвестрируют люминальные протоны, предотвращая эндосомальное закисление и ингибируя передачу сигналов TLR.

Соберите среду, центрифугируйте для отделения надосадочной жидкости и добавьте субстраты для SEAP и люциферазы.

SEAP преобразует свой субстрат в цветной продукт, в то время как люцифераза катализирует его субстрат для производства люминесценции.

Снижение репортерных сигналов указывает на эффективность