Анализ высвобождения красителя для количественной оценки ферментативной активности антимикробных белков

Начните с тюбика, содержащего термически убитую бактериальную суспензию и обработайте раствором красителя.

Молекулы красителя ковалентно связываются с пептидогликаном — важным компонентом клеточной стенки бактерии, придавая ей синюю окраску.

Гранулируйте бактерии и удалите надосадочную жидкость, содержащую несвязанные молекулы красителя.

Ресуспендируйте бактерии и введите в пробирку раствор антимикробного белка, запуская ферментативный гидролиз бактериального пептидогликана, что приводит к деградации клеточной стенки с последующим лизисом клеток.

Это приводит к высвобождению молекул красителя, придающих ему синюю окраску.

Добавьте этанол — денатурирующее белок средство, инактивирующее антимикробные белки и завершающее ферментативную реакцию.

Центрифугируйте содержимое для гранулирования фрагментов клеток и ферментов. Перенесите молекулу красителя надосадочную жидкость на многолуночный планшет.

С помощью считывателя пластин измерьте поглощение на 595 нанометрах.

Сравните абсорбцию образца, обработанного ферментом, с абсорбцией образца, не обработанного ферментом, чтобы количественно оценить ферментативную активность антимикробного белка.

В анализе высвобождения красителя субстрат ко