Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 2:20 мин. • July 8th, 2025
Возьмите многолуночный планшет, содержащий серийные разведения исследуемого соединения, аминогликозидного антибиотика.
Добавьте в лунки суспензию Mycobacterium tuberculosis — патогенной бактерии — и инкубируйте.
В цитоплазме исследуемое соединение связывается с 30S рибосомальной субъединицей микобактерий, подавляя нормальный синтез белка и в конечном итоге приводя к гибели микобактерий.
После инкубации добавьте в культуры резазурин — слабофлуоресцентный водорастворимый краситель. Инкубировать.
Внутри жизнеспособных метаболически активных микобактерий ферменты дегидрогеназы восстанавливают резазурин синего цвета до флуоресцентного резоруфина розового цвета.
С помощью считывателя флуоресцентных планшетов измерьте интенсивность флуоресценции резоруфина в лунках.
Низкое значение интенсивности флуоресценции при увеличении концентрации испытуемого соединения позволяет предположить его цитотоксическое действие в отношении микобактерий.
Для проведения анализа на резазурин выращивают M. tuberculosis в фазе 7H9ADST до mid-log. Разбавьте культуру с помощью 7H9ADST до наружного диаметра600 0,01. Используйте 7H9ADST для разбавления соединений до концентрации, в два раза превышающей исследуемую
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео