Измерение TEER в облученных рентгеновским излучением эпителиальных клетках, совместно культивируемых с PBMC

Возьмите мембранную вставку, содержащую облученный рентгеном монослой эпителия.

Поместите мембранный вкладыш в лунку, содержащую мононуклеарные клетки периферической крови, или PBMC — иммунные клетки, которые секретируют цитокины и другие сигнальные молекулы.

Поместите трансэпителиальные электроды сопротивления (TEER) в мембранную вставку.

Подайте небольшой электрический ток и измерьте сопротивление, чтобы оценить проницаемость монослоя, регулируемую узкими соединениями.

Плотные соединения представляют собой трансмембранные белки, связанные с цитоскелетом через белки каркаса.

Вместе эти соединительные белки образуют прочный барьер между клеточными мембранами, ограничивая прохождение крупных молекул и патогенов.

Неповрежденные соединительные белки препятствуют протеканию электрического тока, что приводит к высокому TEER, что указывает на нормальную проницаемость монослоя.

Рентгеновское воздействие снижает уровень соединительных белков, увеличивая проницаемость монослоя и снижая TEER.

Кроме того, сигнальные молекулы от облученных клеток активируют ко-культивируемые PBMC, которые высвобождают цитокины, вызывая дальнейшее снижение уровня соединительных белков и нарушая целостность барь