Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:34 мин. • July 8th, 2025
Возьмите микропланшет, содержащий клетки млекопитающих, на льду.
Добавьте среду, содержащую кальций, в выбранные лунки и среду без кальция в остальные.
Ввести мономеры бактериального порообразующего токсина. Низкая температура препятствует агрегации мономеров, способствуя связыванию с холестерином клеточной мембраны.
Инкубируют при физиологической температуре, позволяя связанным с холестерином мономерам олигомеризоваться и внедриться в мембрану, образуя пору.
В лунках с внеклеточным кальцием поры вызывают приток кальция.
Приток вызывает экзосомальное выделение токсина и повторное герметизацию мембраны.
Внутриклеточное увеличение кальция также индуцирует лизосомальный экзоцитоз, высвобождая фермент, который превращает сфингомиелин мембраны в церамид.
Обогащенная керамидами мембрана запускает токсинный эндоцитоз, восстанавливая мембрану.
Повторное уплотнение мембраны затруднено в лунках без внеклеточного кальция.
Добавьте йодид пропидия или PI — флуоресцентный краситель — который не может проникнуть в клетки с восстановленной мембраной, но проникает в поврежденные клетки для связывания ДНК, излучая флуоресценцию.
Измеряйте флуоресценцию через определенные промежутки времени, чтобы оц
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео