Иммуногистохимия для изучения взаимосвязи между макрофагами и инфильтрированными иммунными клетками

0 просмотров4:00 мин • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Начните со предметного стекла, содержащего фиксированные формалином, депарафинизированные и регидратированные биопсийные срезы височной артерии с инфильтрированными иммунными клетками, включая лимфоциты и макрофаги.

Активированные макрофаги экспрессируют рецептор фолиевой кислоты бета или FR-β — маркер, связанный с заболеванием, дифференцируя макрофаги от других иммунных клеток.

Перенесите предметное стекло в предварительно нагретый буфер для извлечения поверхностных рецепторов.

Обработайте срез перекисью водорода, блокируя внутриклеточную активность пероксидазы.

Введите смесь первичных антител, нацеленных на CD3, CD68 и FR-β, которые связываются с иммунными клетками, экспрессирующими эти белки.

Добавить биотинилированные вторичные антитела, взаимодействующие с первичными антителами, и промыть.

Покрытие стрептавидин-конъюгированными ферментами, которые связываются с биотином.

Обрабатывают хромогенным субстратом, который взаимодействует с ферментами, образуя локализованные коричневые осадки.

Ввести противокраситель — гематоксилин, окрашивая ядра в синий цвет.

Микроскопически идентифицируют маленькие, круглые, окрашенные в коричневый цвет клетки как CD3-экспрессирующие лимфоциты, а большие, нерегулярные, окрашенные в коричневый цвет клетки как CD68 и макрофаги, экспрессирующие FR-β.

Количественно оцените макрофаги в этом разделе, чтобы найти их соотношение среди общего числа инфильтрированных иммунных клеток.

Для забора антигена переложите штатив в стеклянную емкость с 200 микролитрами 95 градусов Цельсия, 10 миллимолярами на литр, цитратным буфером на 30 минут. По окончании инкубации дайте предметным стеклам остыть до комнатной температуры в течение 20 минут, а затем промойте проточной водой в течение пяти минут.

Чтобы удалить эндогенную активность пероксидазы, сначала с помощью гидрофобного маркера нарисуйте круг вокруг каждого образца ткани, а затем инкубируйте образцы в 200 микролитрах 3% перекиси водорода в течение 10 минут, а затем промывка в 200 микролитрах трис-буферного солевого раствора или ТССС на промывку. После последнего промывки аккуратно промокните каждое предметное стекло, чтобы удалить излишки буфера, и добавьте 200 микролитров основного интересующего коктейля антител и защитного стекла на каждое предметное стекло для часовой инкубации во влажной камере при комнатной температуре.

По окончании инкубации выбросьте покровные стекла и промойте стекла тремя двухминутными стирками в свежем TBSS. После удаления избытка буфера добавьте 200 микролитров соответствующего биотинилированного раствора вторичного антитела и покровную крышку на каждое предметное стекло для 45-минутной инкубации во влажной камере при комнатной температуре. После того, как вы выбросите покровные стекла, промойте слайды TBSS, как показано на рисунке. Удалите лишний буфер.

Поместите секции с 200 микролитрами субстрата DAB в буфер на 10 минут при комнатной температуре. По окончании инкубации вымыть предметные стекла ТБСС и проточной водой из-под крана в течение 10 минут, перед этим провести противостоятельное окрашивание гематоксилином в течение трех минут. Затем добавьте 70 микролитров подходящей монтажной среды в каждую заслонку и медленно накиньте стеклянную защитную крышку на монтажную среду, чтобы избежать образования пузырей при опускании защитного стекла на место.

Для гистопатологического анализа поместите предметное стекло на предметное стекло светового микроскопа и оцените сосудистую архитектуру первого среза ткани. Затем количественно оцените количество макрофагов относительно количества лимфоцитов на срез.

08:47

Индукция экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита у мышей и оценка болезни зависимого распределения иммунных клеток в различных тканях

Похожие видео

0 Просмотры

07:54

Поверхность расширение резонанс комбинационного рассеяния Nanoprobe Ratiometry для обнаружения микроскопического рака яичников через рецептор фолиевой кислоты ориентации

Похожие видео

0 Просмотры

09:01

Цитометрический анализ инфильтрации лимфоцитов в Центральной нервной системе во время экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита

Похожие видео

0 Просмотры

08:10

Простой и эффективный способ изолировать Макрофаги из смешанного первичных культурах клеток взрослого организма Печень

Похожие видео

0 Просмотры

07:42

В пробирке Модель для изучения гетерогенности человека дифференциации макрофагов и поляризация

Похожие видео

0 Просмотры

10:43

Анализ макрофагов Microglia и Monocyte из центральной нервной системы методом проточной цитометрии

Похожие видео

0 Просмотры

07:05

Флуоресценции опосредованной томография для выявления и количественной оценки мышиных кишечного воспаления Макрофаг связанных

Похожие видео

0 Просмотры

08:36

В vitro Анализ для изучения опухоли макрофаг взаимодействия

Похожие видео

0 Просмотры

10:23

Time-Lapse 2D Изображение фагоцитарной активности в M1 Макрофаг-4T1 Мышь Mammary Карцином Клетки в ко-культур

Похожие видео

0 Просмотры

10:40

Иммунофлуоресценция пятно использованием IBA1 и TMEM119 для микроглиальной плотности, морфологии и периферической миелоидной клеточной инфильтрации анализа в мышиный мозг

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 15 августа 2026