Усовершенствованный метод сшивки иммунопреципитации для эффективной идентификации белок-связанной РНК в яичках мышей
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 5:07 мин. • July 8th, 2025
Возьмите свежесобранные яички мыши в охлажденном буфере. Удалите белочную оболочку, фиброзный слой ткани.
Растирайте яички, чтобы освободить семенные канальцы, содержащие зародышевые клетки и клетки Сертоли.
Добавьте буфер и подвергните канальцы воздействию ультрафиолетового излучения для необратимого сшивания РНК с ассоциированными белками, сохраняя взаимодействия.
Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость.
Ресуспендируйте канальцы в буфере для лизиса, содержащем РНКазу и ингибиторы протеазы.
Обрабатывают ткань ультразвуком, высвобождая комплексы белок-РНК и другие внутриклеточные компоненты. Ингибиторы РНКазы и протеазы инактивируют эндогенные РНКазы и протеазы.
Добавьте ДНКазу для деградации ДНК. Вводите разбавленную РНКазу для частичного расщепления РНК.
Центрифугировать и перенести надосадочную жидкость, содержащую комплексы РНК-белок, в покрытый антителами раствор магнитных шариков с высокой специфичностью к целевому РНК-связывающему белку.
Примените магнитное поле для разделения связанных с гранулами комплексов белок-РНК. Выбросьте надосадочную жидкость.
Постирайте с буфером. Магнитным путем разделяют комплексы белок-РНК и используют их для дальнейшего анализа взаимо
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео