Анализ клеточного цикла антиген-специфичных CD8⁺ Т-клеток

Возьмите вторичные лимфоидные клетки органов от иммунизированной антигеном мыши, содержащей антиген-специфичные CD8⁺ Т-клетки на разных стадиях клеточного цикла.

G₁, S, G₂ и M являются стадиями активно делящихся клеток, в то время как клетки на стадии G₀ находятся в состоянии покоя.

Добавьте флуоресцентный краситель жизнеспособности для маркировки мертвых клеток, а также помеченные флуорофорами антитела, связывающиеся с маркерами поверхности Т-клеток CD3 и CD8.

Введение мультимеров флуорофор-конъюгированного антигенного пептида-MHC для связывания Т-клеточных рецепторов, маркируя антиген-специфичные Т-клетки.

С помощью буфера зафиксировать и пропитать клетки.

Введение меченных флуорофорами антител для связывания ядерного белка, связанного с пролиферацией клеток, окрашивая активно делящиеся клетки.

Добавьте флуоресцентный краситель к ДНК метки.

С помощью проточной цитометрии выберите живые клетки и идентифицируйте антиген-специфичные CD8⁺ Т-клетки с помощью поверхностных меток.

Интенсивность окрашивания ДНК отличает клетки G₀ и G₁ с меньшим количеством ДНК от клеток S, G₂ и M с большим количеством ДНК. Отсутствие ядерного белок-специфического антитела разделяет клетки G₀.

Приготовьте