Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 4:34 мин. • July 8th, 2025
Начните с многолуночного планшета, содержащего одноклеточную суспензию миелоидных клеток сетчатки мыши, включая микроглию, моноциты и нейтрофилы.
Микроглия — или фагоцитарные иммунные клетки сетчатки, проявляют флуоресценцию за счет поглощенных флуорофорами меченых биочастиц грибкового происхождения, предварительно вводимых интравитреально.
Центрифугируйте и добавьте антитела к Fc-рецепторам, блокируя неспецифические сайты взаимодействия».
Ввести коктейль меченых флуорофорами антител, нацеленных на поверхностные белки CD11b, Ly6C и Ly6G, взаимодействующих с миелоидными клетками, экспрессирующими их.
Удалите несвязанные антитела. Обрабатывайте йодидом пропидия, который проникает через поврежденные мембраны, окрашивая исключительно омертвевшие клетки.
При проточной цитометрии возбуждайте йодидом пропидия для исключения мертвых клеток и идентификации нефлуоресцентных живых клеток.
Осветите клетки фиолетовым лазером; возбужденные живые клетки обозначают миелоидные клетки, экспрессирующие CD11b.
Затем посветите красным лазером, возбуждая ближний красный флуорофор в CD11b-положительных клетках, указывающий на моноциты, экспрессирующие Ly6C, и нейтрофилы, экспрессирующие Ly6G.
Возбуждайте
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео