Анализ проточной цитометрии для идентификации субпопуляций иммунных клеток в мононуклеарных клетках периферической крови

Возьмем, к примеру, мононуклеарные клетки периферической крови или PBMC, популяцию смешанных клеток, включающую лимфоциты и моноциты.

Добавьте флуоресцентный краситель жизнеспособности для распознавания мертвых клеток и коктейль антител с флуоресцентной меткой для идентификации различных типов клеток.

Флюорохром А-конъюгированные антитела связываются с поверхностными маркерами — CD3 на Т-клетках, γδ Т-клеточным рецептором или TCR на γδ Т-клетках и CD56 на естественных киллерах или NK-клетках.

В-конъюгированные антитела флуорохрома связываются с CD4 и CD8 на Т-клетках, CD19 на В-клетках и CD14 на моноцитах.

С помощью проточной цитометрии определите подмножества живых клеток.

В то время как CD8⁺ и CD4⁺ Т-клетки являются CD3⁺, CD4⁺ клетки находятся между CD3 одиночными положительными и CD3-CD8 двойными положительными клетками.

γδ Т-клетки экспрессируют γδ TCR и более высокий CD3 по сравнению с CD4⁺ и CD8⁺ клетками.

В-клетки и ^{NK-клетки} относятся к CD3-, но идентифицируются CD19 на В-клетках и CD56 на NK-клетках.

Моноциты идентифицируются по экспрессии CD14.

Чтобы подготовить PBMC к окрашиванию, переложите 100 микролитров каждого образца на 96-луночную пластину с V-образным дном. Центр