Использование зондов напряжения на основе ДНК для оценки рецепторных сил, прилагаемых иммунными клетками
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 5:58 мин. • July 8th, 2025
Начните с функционализированного стеклянного покровного стекла с наночастицами золота, закрепленными полиэтиленгликолем.
Добавьте зонды натяжения шпильки ДНК, содержащие шпильку ДНК, гибридизированную с двумя олигонуклеотидами в противоположных плечах.
Цепь лиганда включает флуорофор и биотин, в то время как якорная цепь содержит гаситель и тиоловую группу. В этой конфигурации гаситель подавляет флуоресценцию.
Зонды ДНК связываются с наночастицами золота, крепясь к стеклянной покровной крышке.
Вводят стрептавидин, взаимодействующий с молекулами биотина нитей лиганда.
Добавьте биотинилированные лиганды, которые связываются с предварительно связанными молекулами стрептавидина.
Наложите на покровное стекло CD8-положительные Т-клетки, рецепторы которых взаимодействуют с иммобилизованными лигандами, образуя сайт взаимодействия рецептор-лиганд.
Это взаимодействие создает силу, которая разворачивает структуру шпильки ДНК, отделяя флуорофор от гасителя и способствуя излучению флуоресценции.
Введите нефлуоресцентные блокирующие цепи, которые взаимодействуют с развернутыми сегментами зондов для сохранения сигнала флуоресценции.
Количественно оцените флуоресценцию для оценки рецепторных сил,
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео