Анализ на основе CFSE для мониторинга миграции дендритных клеток кожи в дренирующие лимфатические узлы у инфицированных мышей

Возьмите мышь под наркозом. Введите суспензию БЦЖ Mycobacterium bovis в заднюю подушечку лапы.

Дендритные клетки кожи распознают и фагоцитируют микобактерии.

Далее переработанные компоненты микобактерий представлены на молекулах MHC класса-II.

Введите проникающий в клетки краситель CFSE в ту же подушечку для ног.

Внутриклеточные эстеразы расщепляют CFSE на непроницаемый для клеток флуоресцентный продукт, окрашивая клетки.

Далее активированные дендритные клетки мигрируют по лимфатическим сосудам в подколенный лимфатический узел, активируя Т-клетки.

Хирургическим путем иссекают подколенный лимфатический узел и гомогенизируют его через ситечко, получая одноклеточную суспензию.

Центрифугируйте и повторно суспендируйте клетки в буфере.

Перенесите клетки в проточную цитометрическую трубку. Центрифугируйте и обработайте клетки коктейлем антител.

Fc-блокирующие антитела блокируют Fc-рецепторы, в то время как меченные флуорофорами антитела связываются с поверхностными маркерами CD11c и молекулами MHC класса II на иммунных клетках.

С помощью проточной цитометрии выявить меченные CFSE дендритные клетки кожи с высокой экспрессией MHC-II и низкой экспрессией CD11c, подтвердив их миграцию в лимф