Использование липидных бислоев, поддерживаемых шариками, для исследования синаптического выхода Т-клеток

Возьмем, к примеру, липидные бислои на основе гранул, или BSLB, гранулы диоксида кремния, покрытые липидными бислоями, конъюгированными с комплексами антигенного пептида-MHC, адгезионными и костимулирующими молекулами, действующими как синтетические антигенпрезентирующие клетки.

Инкубировать с Т-клетками.

TCR связываются с антигенными пептидами на BSLB, которые наряду с костимулирующими сигналами образуют иммунный синапс, активируя Т-клетки.

Это связывание запускает внутриклеточные сигнальные каскады, индуцируя перестройку актина и образуя микрокластеры в синапсе, содержащие адгезионные и сигнальные молекулы.

Т-клетки выделяют транссинаптические везикулы, обогащенные TCR, костимулирующими молекулами и содержимым литических гранул, в синапс, связываясь с BSLB.

Постепенно охлаждайте кокультуру, чтобы отделить BSLB от Т-клеток.

Центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость. Используйте белок-содержащий буфер для блокирования свободных участков связывания на поверхностях.

Центрифугируйте и обрабатывайте BSLB и Т-клетки флуорофор-конъюгированными антителами, которые связываются со специфическими сигнальными и костимулирующими молекулами.

Используя проточную цитометрию, проанализируй