Анализ для количественного определения цитозольной и вакуолярной сальмонеллы в инфицированных первичных макрофагах
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 6:27 мин. • July 8th, 2025
Возьмите культуру макрофагов, полученных из костного мозга. Удалите среду и добавьте бактерии сальмонеллы, экспрессирующие флуоресцентный цитоплазматический белок.
Центрифуга для облегчения контакта бактерий и макрофагов и инкубация.
Бактерии связываются с рецепторами макрофагов, способствуя интернализации внутри фагосомы.
Фагосома сливается с везикулами, полученными из эндосом, и одновременно бактерии секретируют эффекторы, ремоделируя фагосому в вакуоль, содержащую сальмонеллу, или SCV.
Подмножество SCV разрывается, высвобождая интернализованные бактерии в цитоплазму.
Добавьте антибиотик для уничтожения неинтернализованных бактерий. Аспирируйте среды, содержащие мертвые бактерии.
Введите буфер, содержащий детергент дигитонин, который связывается с холестерином.
Связывание дигитонина с богатой холестерином плазматической мембраной приводит к образованию пор, в то время как мембрана SCV с дефицитом холестерина остается неповрежденной — явление, называемое дифференциальной пермеабилизацией.
Добавьте флуоресцентно меченые антитела, которые проникают в проникающие клетки для связывания цитозольных бактерий.
Используйте моющее средство для лизирования клеток и SCV, высвобождая все внут
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео