Клеточный анализ для идентификации агентов, взаимодействующих с CXCR4
Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 5:52 мин. • July 8th, 2025
Возьмите многолуночный планшет, покрытый желатином, содержащий прилипшие клетки рака мозга человека, экспрессирующие CXCR4.
Замените носитель на кальций-чувствительный краситель. Внутриклеточные эстеразы расщепляют краситель в непроницаемый для мембраны продукт, который связывается с ионами кальция, проявляя повышенную флуоресценцию.
Удалите краситель, промойте и добавьте буфер.
Поместите планшет в флуоресцентный считыватель микропланшетов с соединением, взаимодействующим с CXCR4 и содержащими хемокин CXCL12 планшетами.
Используя заданные автоматизированные параметры, закачивать в тестовые скважины увеличивающиеся концентрации компаундов, а затем удельную концентрацию CXCL12.
В контрольных лунках без компаунда CXCL12 связывается с CXCR4.
Это связывание активирует сигнальный каскад, высвобождая ионы кальция в цитоплазму, где они связывают краситель, усиливая флуоресценцию.
Однако в тестовых лунках взаимодействующие соединения ингибируют связывание CXCL12 с CXCR4, влияя на мобилизацию кальция и вызывая дозозависимое снижение флуоресценции, подтверждая их в качестве антагонистов CXCR4.
В день пропускания клеток покройте каждую лунку из 96-луночного полистирольного планшета с черными с
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео