Оценка эффективности тестируемого противовирусного соединения с помощью анализа на вирусную инактивацию

Возьмите пробирки с рекомбинантным вирусом гепатита С или суспензией ВГС, содержащей РНК, кодирующую секретируемый репортер люциферазы.

Добавьте противовирусное тестовое соединение и растворитель в тестовую и отрицательную контрольные пробирки.

Исследуемые соединения связываются с гликопротеинами ВГС, инактивируя вирус.

После инкубации разбавляйте смеси, чтобы предотвратить взаимодействие соединения с клетками на последующих этапах.

Добавьте эти разведенные смеси на монослои гепатомы, поддерживающие HCV-репликацию. Инкубировать.

Инактивированный соединением HCV не может прикрепляться к специфическим рецепторам клеточной поверхности, в то время как активные гликопротеины HCV связываются с этими рецепторами, облегчая клеточное прикрепление.

Удалите неадсорбированные вирусы гепатита С. Промойте буфером и добавьте фильтрующий материал. Инкубируйте в течение длительного времени.

Связанный HCV интернализуется, высвобождая вирусную РНК и приводя к синтезу вирусного белка и люциферазы, секретируемых клеткой.

Соберите люциферазосодержащие надосадочные жидкости культуры. Центрифугируйте и добавьте к надосадочной жидкости субстрат люциферазы.

Люцифераза окисляет подложку, излучая свет.

Более