Энциклопедия экспериментов JoVE
Иммунология
0 просмотров • 3:04 мин. • July 8th, 2025
Начните с ДНКфермента, расщепляющей РНК, каталитической ДНК, которая при связывании с определенным бактериальным биомаркером активируется.
ДНКфермент связан с магнитным шариком, покрытым стрептавидином, через биотин на его 5'-конце. На 3'-конце он связан с олигонуклеотид-связанной уреазой, образуя функциональную магнитную бусину.
В пробирку, содержащую функциональные магнитные шарики, добавьте лизат кишечной палочки.
Специфический биомаркер E. coli из лизата активирует ДНКфермент, вызывая расщепление связи РНК, вызывая отслоение конъюгата ДНК-уреаза.
С помощью магнитной подставки обездвижите шарики и удалите связанный с шариками конъюгат ДНКфермент-уреаза.
Перенесите высвободившуюся уреазу-содержащую надосадочную жидкость в другую пробирку.
Добавьте краситель для индикатора pH — феноловый красный, и раствор мочевины.
Уреаза гидролизует мочевину до аммиака и углекислого газа.
Аммиак, слабое основание, повышает pH раствора, вызывая изменение цвета, что указывает на наличие биомаркера кишечной палочки.
После подготовки клеток E. coli по текстовому протоколу предварительно промойте 1,5-миллилитровую микрофужерную пробирку, добавив и вортексировав 100 микролитров RB. Затем выбросьте буф
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео